方案 21.4 用 Bradford方法测定蛋白质含量实验

溶解蛋白质，与染料混匀，l0min 后阅读 O.D.。

材料

十二烷基硫酸钠（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考马斯亮蓝 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%)，溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷酸：将 100 mg 考马斯蓝溶于 50 ml 95% 乙醇，加人 100 ml 85% 磷酸；然后以 1L 水稀释。

蛋白质标准溶液（如 BSAlOpg/ml)；设计实验，然后间隔 1～2 个月，以 BSA 或相似的标准蛋白质（1 50ug/ml) 制作标准曲线。

操作步骤

1. 将蛋內质（1～20ug）或细胞（约 1X10⁶) 溶于 100ul3.5 mmol/L SLS 或 0.3mol/L NaOH 中。

2. 分别加人 100ul 试剂空白对照（SLS)，100ul 受测蛋白质溶液，lOOul BSA 标准品，每个 3 管。

3. 加人 lml 考马斯蓝。混匀溶液，静置 10 min。

4. 在分光光度计 595nm 处，以试剂空白作对照，阅读受测管如 BSA 标准数字。

提示 Bradford 法的试剂可以从 Bio - Rad 购得试剂盒。试剂盒中的磺基罗丹明（Sulforhodamine B) [Skehanetal， 1990 ] 和试剂 N -二（羟乙基）甘氨酸 (BCA ) [Smith et al.， 1 9 8 5 ] 都可用于测定蛋白质的含量并且对微量滴定实验敏感度很高。Micro -BCA 试剂盒可从 Piece (见附录 ID ) 得到。这些试剂很灵敏，适用于少量细胞（约 1X10³) 的检测。