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植物体内游离脯氨酸的测定实验

相关实验:植物体内游离脯氨酸的测定实验

最新修订时间:

原理

在正常环境条件下生长的植物,体内游离脯氨酸的含量较低,但在逆境(如旱,寒,盐等)条件下,植物体内游离脯氨酸的含量可增加10-100倍,因此有人提出游离脯氨酸的含量可作为植物抗逆性指标。

植物体内的游离脯氨酸用磺基水杨酸或酒精提取。在酸性条件下,脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的红色产物,用比色法于520n M 波长下测定脯氨酸的含量。

材料与仪器

小麦
酸性茚三酮 脯氨酸标准溶液 冰醋酸 甲苯
分光光度计 分析天平 恒温水浴 研钵 容量瓶 具塞试管 移液管 漏斗 滤纸

步骤

一、仪器设备

分光光度计,分析天平,恒温水浴 ,研钵 ,容量瓶,具塞试管,移液管,漏斗,滤纸

具塞试管:25毫升9支

移液管:2毫升4支,5毫升2支


二、试剂

1.酸性茚三酮:称取2.5克茚三酮,加入60毫升冰醋酸和40毫升6 M 磷酸,于70℃下加热溶解。冷却后贮于棕色试剂瓶中备用。4℃下2~3日内有效。

2.脯氨酸标准溶液:称取0.0250克脯氨酸,溶解在250毫升蒸馏水中,其浓度为100微克/毫升。再取此液10毫升,用蒸馏水稀释至100毫升,即为10微克/毫升之脯氨酸标准液。

3.冰醋酸

4.甲苯

若用磺基水杨酸提取,需要配制3%的磺基水杨酸溶液。(若用酒精提取,需要80%的酒精,活性炭,人造沸石)。

三、材料

生长在灌水及干旱条件下的小麦或其它作物。

四、方法步骤

1.制作标准曲线:取7支25毫升具塞试管,编号。分别向各管准确加入 脯氨酸标准液(每毫升含脯氨酸10微克)0,0.2,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0毫升,再用蒸馏水将体积补至2毫升,摇匀,便配成了分别含0,2,4,8,12,16,20微克脯氨酸的标准系列。再向各管加入冰醋酸和酸性茚三酮各2毫升。摇匀后,在沸水浴中加热显色30分钟,取出后冷却至室温,向各管加入5毫升甲苯,充分摇动,以萃取红色产物。萃取完后(避光静置4小时以上),待完全分层后,用吸管吸取甲苯层,用分光光度计在520n M 波长下测定消光值,以脯氨酸含量为横座标,消光值为纵座标,绘制标准曲线。

2.游离脯氨酸提取:植物体内的游离脯氨酸可以用3%的磺基水杨酸提取。磺基水杨酸提取:称取新鲜和萎蔫小麦叶片各0.5克,将称好的样品放入具塞试管中,加入5毫升3%的磺基水杨酸溶液,将试管浸入沸水浴中提取15分钟,过滤,滤液待测。

3.测定:吸取滤液2毫升于试管内,与标准浓度的脯氨酸系列溶液同法显色测定。

4.计算:测定结果按下式计算



式中:C=从标准曲线上查得脯氨酸微克数;
      V=提取液总体积(毫升);
      a=测定时取用提取液毫升数;
     W=样品干重(克),106=将克换算为微克。

来源:丁香实验

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