原理
人体疟原虫有四种，即间日疟原虫（P．vivax），三日疟原虫（P. malariae），恶性疟原虫（P. falciparum）及卵形疟原虫（P. ovale）。间日疟原虫及恶性疟原虫较多见，三日疟原虫及卵形疟原虫较少见和罕见。疟原虫需要两个宿主才能完成其生活史，在人体内进行裂体增殖，包括红细胞外期、红细胞内期，在蚊体内进行配子生殖和孢子生殖。
一、间日疟原虫薄血膜染色标本 (Thin Blood Smears of Plasmodium vivax )
间日疟患者血涂片，瑞一姬氏染色，镜下观察。 先在低倍镜下确定血膜平面，血涂片薄而均匀或红细胞呈单层均匀排列的部位（通常为血片近末端），加油后，转油镜观察。在红细胞内找疟原虫，经瑞一姬氏染色后，疟原虫的细胞质染成蓝色，细胞核染成红色、疟色素(malarial pigment)为黄褐色。注意与血片中的其他细胞、染料渣等区别。
1．环状体（Ring form） 此期被寄生的红细胞尚无改变。疟原虫的细胞质呈环状，红色的核为点状，在环的一边，很象一个宝石戒指。环状体的大小约占红细胞直径的l/3~l/4左右。
2．大滋养体（Large trophozoite） 环状体进一步发育的形态，此时被寄生的红细胞胀大，色较淡，红细胞上常有许多红色小点即薛氏小点（Schuffner’s dots）。原虫的细胞质增多有伪足伸出。红色的核也显著增大，细胞质上有黄褐色的疟色素颗粒。
3．裂殖体(Schizont) 有未成熟与成熟两种形态。此时细胞质较致密，伪足已消失，核先分裂，然后细胞质分裂，未成熟裂殖体(unmature schizont)的核尚未分裂到一定数目，细胞质尚未分开。成熟裂殖体(mature schizont)的核已分裂到一定数目即12~24个（平均16个），细胞质围绕每一个细胞核形成裂殖子。此时黄褐色的疟色素颗粒集中在虫体中央或一侧。
4．配子体(gametocyte) 经过3～5代裂体增殖后，有一部分裂殖子侵入红细胞后发育为配子体。此时被寄生的红细胞胀大。雌雄配子体均呈圆形，疟色素颗粒则均匀地分布在细胞质中。雌配子体(macrogametocyte)的核与细胞质均较致密，染色后细胞质为兰色，核为红色偏于一边,即为核小、致密、在一边。雄配子体(microgametocyte)核与细胞质较疏松，核较大，位近中央，即为核大、疏松、在中央。
图一、Fig. 1:正常红细胞 Normal red cell; Figs. 2-6:小滋养体 Young trophozoites (ring stage parasites);Figs. 7-18: 大滋养体Trophozoites;Figs. 19-27: 裂殖体Schizonts;（19-22 unmature schizont;23-27 mature schizont） Figs.28 and 29:雌配子体 Macrogametocytes (female);Fig. 30: 雄配子体 Microgametocyte (male).
二恶性疟原虫薄血膜染色标本(Thin Blood Smears of Plasmodium falciparum)
观察方法与间日疟原虫标本相同。环状体较间日疟的小，占红细胞的1／6左右。环小，常在一个环上有一个细胞核，有的环状体贴于红细胞边缘，尤如飞鸟状。一个红细胞内常可见二个或更多的恶性疟原虫环状体。恶性疟原虫的大滋养体与裂殖体在周围血液中一般不易查见。配子体所寄生的红细胞常被胀破而不见。雌配子体呈新月形，两端较尖。雄配子体呈腊肠形，两端较圆。细胞核都在虫体中央，核的周围有疟色素颗粒。
图二、 1: 正常红细胞Normal red cell;Figs. 2-18:滋养体Trophozoites (among these, Figs. 2-10 correspond to ring-stage trophozoites); Figs. 19-26: 裂殖体Schizonts (Fig. 26 is a ruptured schizont); Figs. 27, 28:雌配子体 macrogametocytes (female); Figs. 29, 30: 雄配子体 microgametocytes (male).
一、间日疟原虫薄血膜染色标本 (Thin Blood Smears of Plasmodium vivax )
间日疟患者血涂片，瑞一姬氏染色，镜下观察。 先在低倍镜下确定血膜平面，血涂片薄而均匀或红细胞呈单层均匀排列的部位（通常为血片近末端），加油后，转油镜观察。在红细胞内找疟原虫，经瑞一姬氏染色后，疟原虫的细胞质染成蓝色，细胞核染成红色、疟色素(malarial pigment)为黄褐色。注意与血片中的其他细胞、染料渣等区别。
1．环状体（Ring form） 此期被寄生的红细胞尚无改变。疟原虫的细胞质呈环状，红色的核为点状，在环的一边，很象一个宝石戒指。环状体的大小约占红细胞直径的l/3~l/4左右。
2．大滋养体（Large trophozoite） 环状体进一步发育的形态，此时被寄生的红细胞胀大，色较淡，红细胞上常有许多红色小点即薛氏小点（Schuffner’s dots）。原虫的细胞质增多有伪足伸出。红色的核也显著增大，细胞质上有黄褐色的疟色素颗粒。
3．裂殖体(Schizont) 有未成熟与成熟两种形态。此时细胞质较致密，伪足已消失，核先分裂，然后细胞质分裂，未成熟裂殖体(unmature schizont)的核尚未分裂到一定数目，细胞质尚未分开。成熟裂殖体(mature schizont)的核已分裂到一定数目即12~24个（平均16个），细胞质围绕每一个细胞核形成裂殖子。此时黄褐色的疟色素颗粒集中在虫体中央或一侧。
4．配子体(gametocyte) 经过3～5代裂体增殖后，有一部分裂殖子侵入红细胞后发育为配子体。此时被寄生的红细胞胀大。雌雄配子体均呈圆形，疟色素颗粒则均匀地分布在细胞质中。雌配子体(macrogametocyte)的核与细胞质均较致密，染色后细胞质为兰色，核为红色偏于一边,即为核小、致密、在一边。雄配子体(microgametocyte)核与细胞质较疏松，核较大，位近中央，即为核大、疏松、在中央。
图一、Fig. 1:正常红细胞 Normal red cell; Figs. 2-6:小滋养体 Young trophozoites (ring stage parasites);Figs. 7-18: 大滋养体Trophozoites;Figs. 19-27: 裂殖体Schizonts;（19-22 unmature schizont;23-27 mature schizont） Figs.28 and 29:雌配子体 Macrogametocytes (female);Fig. 30: 雄配子体 Microgametocyte (male).
二恶性疟原虫薄血膜染色标本(Thin Blood Smears of Plasmodium falciparum)
观察方法与间日疟原虫标本相同。环状体较间日疟的小，占红细胞的1／6左右。环小，常在一个环上有一个细胞核，有的环状体贴于红细胞边缘，尤如飞鸟状。一个红细胞内常可见二个或更多的恶性疟原虫环状体。恶性疟原虫的大滋养体与裂殖体在周围血液中一般不易查见。配子体所寄生的红细胞常被胀破而不见。雌配子体呈新月形，两端较尖。雄配子体呈腊肠形，两端较圆。细胞核都在虫体中央，核的周围有疟色素颗粒。
图二、 1: 正常红细胞Normal red cell;Figs. 2-18:滋养体Trophozoites (among these, Figs. 2-10 correspond to ring-stage trophozoites); Figs. 19-26: 裂殖体Schizonts (Fig. 26 is a ruptured schizont); Figs. 27, 28:雌配子体 macrogametocytes (female); Figs. 29, 30: 雄配子体 microgametocytes (male).
材料与仪器
感染鼠；载玻片 消毒棉球 乙醇 剪刀 蜡笔 吸管 蒸馏水 培养皿 姬氏或瑞氏染液 缓冲液
步骤
1. 薄血膜（thin blood film）制作方法
（1）采血：临床上取病人耳垂或指尖血，本次实验用感染疟原虫的小鼠尾尖血。
（2）操作方法：剪去小鼠尾尖取一洁净载玻片，左手持玻片两端，另选1张边缘光滑平整的玻片作推片。用推片一端的中央从鼠尾端取1小滴血（约米粒大），置载玻片的中部，使推片和玻片保持30～40度夹角，将血滴在推片边缘展开后，匀速向前推动，即形成舌状血膜。
2.厚血膜（thick blood film）制作方法
（1）采血同薄血膜法
（2）操作方法：厚血膜可置于薄血膜的另一端。用推片的一角从鼠尾取血2一3滴，自里向外顺着一个方向徐成直径约1 cm大小，厚薄均匀的血膜。厚、薄血膜间用蜡笔画线分开。充分晾干后，滴加蒸馏水于厚血膜上溶血，将水倾去，晾干后与薄血膜一起染色。
3. 固定、染色
（1）瑞氏染色：先用蜡笔在血膜两端划上线，以防染液外溢。瑞氏染液为甲醇溶液，血膜不需预固定、此染色法快速，适于临床检验，但较易褪色，保存时间不长。
滴加瑞氏染液数滴，使之覆盖血膜，约1～2 min后血膜被染液中的甲醇固定，再加与染液等量的缓冲液或蒸馏水，轻摇载玻片，使染液与稀释液混匀，3～5 min后用缓冲液或自来水从玻片一端冲洗，晾干后镜检。
（1）采血：临床上取病人耳垂或指尖血，本次实验用感染疟原虫的小鼠尾尖血。
（2）操作方法：剪去小鼠尾尖取一洁净载玻片，左手持玻片两端，另选1张边缘光滑平整的玻片作推片。用推片一端的中央从鼠尾端取1小滴血（约米粒大），置载玻片的中部，使推片和玻片保持30～40度夹角，将血滴在推片边缘展开后，匀速向前推动，即形成舌状血膜。
2.厚血膜（thick blood film）制作方法
（1）采血同薄血膜法
（2）操作方法：厚血膜可置于薄血膜的另一端。用推片的一角从鼠尾取血2一3滴，自里向外顺着一个方向徐成直径约1 cm大小，厚薄均匀的血膜。厚、薄血膜间用蜡笔画线分开。充分晾干后，滴加蒸馏水于厚血膜上溶血，将水倾去，晾干后与薄血膜一起染色。
3. 固定、染色
（1）瑞氏染色：先用蜡笔在血膜两端划上线，以防染液外溢。瑞氏染液为甲醇溶液，血膜不需预固定、此染色法快速，适于临床检验，但较易褪色，保存时间不长。
滴加瑞氏染液数滴，使之覆盖血膜，约1～2 min后血膜被染液中的甲醇固定，再加与染液等量的缓冲液或蒸馏水，轻摇载玻片，使染液与稀释液混匀，3～5 min后用缓冲液或自来水从玻片一端冲洗，晾干后镜检。
注意事项
1. 玻片要洁净，无油脂。血量适中，推速均匀，以防血膜过厚、过薄或出现条状横纹。血片在干燥过程中，避免灰尘或苍蝇脱吸。
2. 厚薄皿膜制备在一张载玻片时，应注意在厚血膜溶血前必须先用甲醇固定薄血膜，以避免接触水而使薄血膜上的红细胞溶解。厚血膜溶血时间不可太长，不要振荡，以防血膜脱落。
3. 染液是甲醇溶液，切忌混入水滴，否则发生沉淀，妨碍染色，故染液发现有沉淀时不可再用。
4. 滴加染料切忌太多，否则染料残渣粘在血膜上无法洗净，影响检查。加水后必须与染料充分混合，否则发生染色不均。冲洗血膜时应流水直接将染液冲去，避免染料粘着血膜。
间日疟红内期厚血膜法镜下观
来源：丁香实验
