原理
浸润性生长是细胞浸入或穿透其它组织增殖生长能力,浸润生长性检测是检测癌性细胞的一项有意义的指标。检测方法需用其它正常组织和癌细胞共同培养,观察癌细胞向正常组织浸润生长的情况。
材料与仪器
鸡胚
Bacto琼脂 Eagle 缓冲液 小牛血清 福尔马林 Hanks液 碘酒
玻璃圈 CO2温箱 培养皿 平皿盖 手术剪 手术钳 离心机 注射器 烧杯
Bacto琼脂 Eagle 缓冲液 小牛血清 福尔马林 Hanks液 碘酒
玻璃圈 CO2温箱 培养皿 平皿盖 手术剪 手术钳 离心机 注射器 烧杯
步骤
常用鸡胚皮肤或心肌组织块,作为被浸润生长的对象;今以鸡胚皮肤为例,培养过程如下
1. 程序
(1)鸡胚浸出液制备
(3)鸡胚皮培养
无菌从10 天胚龄鸡胚背部取皮,切成6~8mm3小块;每皿中置2~3 块,贴在琼脂层表面;
(4)取内径6 mm,厚2 mm的无菌小磁杯或玻璃圈(硅橡胶圈亦可),套在鸡皮小块上;
(5)共培养
向每个小磁圈中加入25~30 ul 细胞悬液(含104个细胞的2 倍培养液),盖上平皿盖,置37 ℃CO2温箱中培养;
(6)补液
次日再向每个环中补加2 倍培养液2.5 ul;
(7)切片观察
第4 天挖取出鸡皮块,10%福尔马林固定,常规包埋、切片、染色、光学显微镜下观察细胞对鸡胚皮肤浸润的情况。
2. 结果
如癌性细胞已浸入鸡胚皮肤内,说明该细胞具有浸润生长能力。
1. 程序
(1)鸡胚浸出液制备
(2)琼脂层制备
1 %Bacto琼脂(用不含NaHCO3的Eagle缓冲液配)10 分
小牛血清 4 分
鸡胚浸出液 4 分
(3)鸡胚皮培养
无菌从10 天胚龄鸡胚背部取皮,切成6~8mm3小块;每皿中置2~3 块,贴在琼脂层表面;
(4)取内径6 mm,厚2 mm的无菌小磁杯或玻璃圈(硅橡胶圈亦可),套在鸡皮小块上;
(5)共培养
向每个小磁圈中加入25~30 ul 细胞悬液(含104个细胞的2 倍培养液),盖上平皿盖,置37 ℃CO2温箱中培养;
(6)补液
次日再向每个环中补加2 倍培养液2.5 ul;
(7)切片观察
第4 天挖取出鸡皮块,10%福尔马林固定,常规包埋、切片、染色、光学显微镜下观察细胞对鸡胚皮肤浸润的情况。
2. 结果
如癌性细胞已浸入鸡胚皮肤内,说明该细胞具有浸润生长能力。
注意事项
实验过程应避免细菌感染,如癌性细胞已浸入鸡胚皮肤内,说明该细胞具有浸润生长能力。
常见问题
鸡胚浸出液内含有生长因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等,有刺激细胞生长作用,为早年培养使用的培养用液,现已被合成培养液所代替,但在某些研究中仍有一定应用价值。
来源《组织培养和分子细胞学技术》
来源:丁香实验