原理
采用两株识别不同表位的抗 IL-8 单克隆抗体，其中一株（4D7）作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的 IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的 IL-8 的另一个表位结合并催化底物显色。
材料与仪器
抗体、标准品、ABTS、缓冲液、PBS、ELISA 板；
步骤
1. 包被
pH9.5 碳酸盐缓液稀释 4D7 单克隆抗体粗提 γ 球蛋白至 1 μg/ml，加入 96 孔板，100 μl/孔，放 4 ℃，36 小时。
2. 封闭
0.1％ 吐温 PBS（Buffer A）冲洗 96 孔板三次，加 3％ BSA Buffer A（Buffer B）200 μl/孔，放 37℃，1 小时。
3. 加待检样品
Buffer A 冲洗 96 孔板三次，加待检样品及 Buffer B 稀释的标准品 100 μl/孔，放 37℃，3 小时。
4. 加酶标抗体
Buffer A 冲洗 96 孔板五次，3％ PEG Buffer A 稀释酶标抗体至1∶800，加入 96 孔板，100 μl/孔，放 37 ℃，1 小时。
5. 显色
Buffer A 冲洗 96 孔板五次，pH5.4 柠檬酸缓冲液溶解底物（ABTS），0.2 mg/ml，加 3％ H2O2，2 μl/ml，加入 96 孔板，100 μ/孔，室温下或 37℃ 显色。
注意事项
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快（6 小时以内）分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
来源：丁香实验
