原理
采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
材料与仪器
抗体 标准品 ABTS
缓冲液 PBS
ELISA板
缓冲液 PBS
ELISA板
步骤
1. 包被
pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小时。
2. 封闭
0.1 %吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3 %BSA Buffer A(Buffer B)200 μl/孔,放37 ℃,1 小时。
3. 加待检样品
Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/孔,放37 ℃,3 小时。
4. 加酶标抗体
Buffer A冲洗96孔板五次,3 %PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加入96孔板,100 μl/孔,放37 ℃,1 小时。
5. 显色
Buffer A冲洗96孔板五次,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)),0.2 mg/ml,加3 %H2O2,2 μl/ml,加入96孔板,100 μ/孔,室温下或37 ℃显色。
pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小时。
2. 封闭
0.1 %吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3 %BSA Buffer A(Buffer B)200 μl/孔,放37 ℃,1 小时。
3. 加待检样品
Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/孔,放37 ℃,3 小时。
4. 加酶标抗体
Buffer A冲洗96孔板五次,3 %PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加入96孔板,100 μl/孔,放37 ℃,1 小时。
5. 显色
Buffer A冲洗96孔板五次,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)),0.2 mg/ml,加3 %H2O2,2 μl/ml,加入96孔板,100 μ/孔,室温下或37 ℃显色。
注意事项
1. 待检标本如为血清,应采用一次性容器,血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
来源:丁香实验