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夹心法ELISA

相关实验:白细胞介素 8(IL- 8)检测实验

最新修订时间:

原理

采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。

材料与仪器

抗体 标准品 ABTS
缓冲液 PBS
ELISA板

步骤

1.  包被

pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96
孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小时。
  
2.  封闭

0.1 %吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3 %BSA Buffer A(Buffer B)
200 μl/孔,放37 ℃,1 小时。

3.  加待检样品

Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/
孔,放37 ℃,3 小时。

4.  加酶标抗体

Buffer A冲洗96孔板五次,3 %PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加
入96孔板,100 μl/孔,放37 ℃,1 小时。
  
5.  显色

Buffer A冲洗96孔板五次,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)),0.2 mg/
ml,加3 %H2O2,2 μl/ml,加入96孔板,100 μ/孔,室温下或37 ℃显色。
 

注意事项

1.  待检标本如为血清,应采用一次性容器,血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
  
2.  封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。

来源:丁香实验

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