原理
两栖动物蛙类的一些基本生命活动与生理功能与恒温动物家兔等相似。在该部分实验中，我们主要以蟾蜍的坐骨神经-腓肠肌的为对象，观察有机磷及不同解救药对离体标 本的一些作用规律。 当我们向神经施加有效电刺激时，就会引起肌肉的收缩，带动描笔， 产生一定的收缩高度。向标本滴加机磷脂药液后，由于其很强的脂溶性，将很快作用于 腓肠肌的 N2 受体后，引起肌肉的持续去极化；此时如再给神经同样强度的刺激，标本的 收缩幅度会出现一过性的升高，之后将很快下降。这就是有机磷中毒的表现。不同解救 药的机理是不同的，阿托品不作用于 N2 受体，对标本的收缩幅度无影响；碘解磷啶虽然 作用于 N2 受体，但由于其脂溶性不强，作用也不甚明显。
材料与仪器
家兔 蟾蜍
硫酸阿托品 敌百虫 解磷啶 任氏液
注射器 测瞳孔尺 刀片 采血杯 动脉夹 棉球 恒温水浴 分光光度计 试管架 试管 吸管 加样器 滤纸 漏斗 蛙类手术器械 电刺激器 标本盒
硫酸阿托品 敌百虫 解磷啶 任氏液
注射器 测瞳孔尺 刀片 采血杯 动脉夹 棉球 恒温水浴 分光光度计 试管架 试管 吸管 加样器 滤纸 漏斗 蛙类手术器械 电刺激器 标本盒
步骤
1. 制备标本
⑴ 破坏脑和脊髓 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，并以食指压住 其头部，使之前俯，右手持探针从枕骨大孔处皮肤垂直刺入。刺入后先将探针向前刺入 颅腔左右搅动以捣毁脑组织，然后将探针抽回原处，再向后刺入椎管以捣毁脊髓。脑和 脊髓完全破坏的标志是动物的四肢松软，呼吸消失。
⑵ 剪除躯干上部及内脏 完成上一部后，在蟾蜍骶髂关节水平之上 0.5～1.0 cm 处 用粗剪刀横断脊柱。然后用左手握住蟾蜍的后肢并以拇指压住骶骨，使其头与后肢自然 下垂；右手持粗剪刀，沿脊柱两侧剪除蟾蜍的一切内脏以及头、胸部，但要注意不要伤 及坐骨神经干。
⑶ 剥皮 先剪去肛门周围皮肤。然后用左手垫纸握住脊柱断端，右手捏住其上的皮 肤边缘，向下剥掉全部皮肤，再将剥皮后的标本放在盛有任氏液的培养皿中。在剥皮时 用力要均匀，手部不可接触标本。
⑷ 将手及用过的手术器械洗净。
⑸ 分离两腿 将所得标本背位放置于蛙板上，于其两侧坐骨神经干下分别穿线并在 尽量靠近脊柱处结扎，以免遗漏腰骶丛的任何分支。于结扎线的脊柱侧剪下神经，并以 结扎线为支持线轻轻提起神经，沿着其走行方向剪去各个分支。将游离后的神经干搭在 大腿肌肉上。持两腿，从背侧剪断两侧的犁状肌，沿脊柱两侧向上剪开并剔除脊柱。将 两侧大腿连同下肢带骨相对扭动、脱关节，于耻骨联合中央剪开并剔除脊柱。将两侧大腿连同下肢骨相对扭动、脱关节，于耻骨联合中央剪开两侧大腿。将一腿放回培养皿中。
⑹ 游离坐骨神经 用玻璃钩沿神经走行方向进行分离。用支持线轻轻提起神经，顺 其走行方向剪去分支，分离坐骨神经至掴窝处。将坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮干净，然后在股骨中部剪断，保留下段股 骨约 1 厘米。用探针在跟腱处扎一小孔备用，然后剪断跟腱，游离腓肠肌至膝关节，沿 膝关节囊将小腿其余部分剪掉。用经任氏液润湿的锌铜弓轻轻接触一下坐骨神经，如果 腓肠肌发生迅速而明显的收缩，表明标本兴奋性良好，即可将标本置于盛有任氏液的培 养皿中备用。
2. 固定标本 将坐骨神经标本固定于肌动器内。将负荷螺丝旋离描记杠杆，调节初长螺丝，使杠杆处于水平位置，调整好描笔，使笔尖与记纹鼓面相切。
3. 寻找适宜刺激条件
波宽约 0.5 ms，用中等刺激强度的单个脉冲刺激坐骨神经，每发出一次刺激，可见 肌肉收缩一次。选择使肌肉收缩幅度最大而强度最小的刺激为最适刺激强度，实验过程 中将保持这一强度不变。
4. 观察有机磷以及不同解救药对坐骨神经腓肠肌标本的作用
⑴ 选用连续 B 刺激方式，B 时间可定为 4 或 8。用电动记纹鼓（较慢转速）进行记 录，描记正常单收缩曲线。
⑵ 向标本上滴加 1%有机磷药液数滴，观察腓肠肌收缩曲线的变化情况。
⑶ 向中毒后的标本上滴加阿托品或解磷啶药液，观察不同解救药的解救效果。并对所观察的现象进行分析、讨论。
⑴ 破坏脑和脊髓 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，并以食指压住 其头部，使之前俯，右手持探针从枕骨大孔处皮肤垂直刺入。刺入后先将探针向前刺入 颅腔左右搅动以捣毁脑组织，然后将探针抽回原处，再向后刺入椎管以捣毁脊髓。脑和 脊髓完全破坏的标志是动物的四肢松软，呼吸消失。
⑵ 剪除躯干上部及内脏 完成上一部后，在蟾蜍骶髂关节水平之上 0.5～1.0 cm 处 用粗剪刀横断脊柱。然后用左手握住蟾蜍的后肢并以拇指压住骶骨，使其头与后肢自然 下垂；右手持粗剪刀，沿脊柱两侧剪除蟾蜍的一切内脏以及头、胸部，但要注意不要伤 及坐骨神经干。
⑶ 剥皮 先剪去肛门周围皮肤。然后用左手垫纸握住脊柱断端，右手捏住其上的皮 肤边缘，向下剥掉全部皮肤，再将剥皮后的标本放在盛有任氏液的培养皿中。在剥皮时 用力要均匀，手部不可接触标本。
⑷ 将手及用过的手术器械洗净。
⑸ 分离两腿 将所得标本背位放置于蛙板上，于其两侧坐骨神经干下分别穿线并在 尽量靠近脊柱处结扎，以免遗漏腰骶丛的任何分支。于结扎线的脊柱侧剪下神经，并以 结扎线为支持线轻轻提起神经，沿着其走行方向剪去各个分支。将游离后的神经干搭在 大腿肌肉上。持两腿，从背侧剪断两侧的犁状肌，沿脊柱两侧向上剪开并剔除脊柱。将 两侧大腿连同下肢带骨相对扭动、脱关节，于耻骨联合中央剪开并剔除脊柱。将两侧大腿连同下肢骨相对扭动、脱关节，于耻骨联合中央剪开两侧大腿。将一腿放回培养皿中。
⑹ 游离坐骨神经 用玻璃钩沿神经走行方向进行分离。用支持线轻轻提起神经，顺 其走行方向剪去分支，分离坐骨神经至掴窝处。将坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮干净，然后在股骨中部剪断，保留下段股 骨约 1 厘米。用探针在跟腱处扎一小孔备用，然后剪断跟腱，游离腓肠肌至膝关节，沿 膝关节囊将小腿其余部分剪掉。用经任氏液润湿的锌铜弓轻轻接触一下坐骨神经，如果 腓肠肌发生迅速而明显的收缩，表明标本兴奋性良好，即可将标本置于盛有任氏液的培 养皿中备用。
2. 固定标本 将坐骨神经标本固定于肌动器内。将负荷螺丝旋离描记杠杆，调节初长螺丝，使杠杆处于水平位置，调整好描笔，使笔尖与记纹鼓面相切。
3. 寻找适宜刺激条件
波宽约 0.5 ms，用中等刺激强度的单个脉冲刺激坐骨神经，每发出一次刺激，可见 肌肉收缩一次。选择使肌肉收缩幅度最大而强度最小的刺激为最适刺激强度，实验过程 中将保持这一强度不变。
4. 观察有机磷以及不同解救药对坐骨神经腓肠肌标本的作用
⑴ 选用连续 B 刺激方式，B 时间可定为 4 或 8。用电动记纹鼓（较慢转速）进行记 录，描记正常单收缩曲线。
⑵ 向标本上滴加 1%有机磷药液数滴，观察腓肠肌收缩曲线的变化情况。
⑶ 向中毒后的标本上滴加阿托品或解磷啶药液，观察不同解救药的解救效果。并对所观察的现象进行分析、讨论。
注意事项
1. 实验过程中，保持初长螺丝及刺激参数不变。
2. 实验过程中，不要改变刺激强度。
3. 实验过程中保证肌肉有适当的休息时间，并不断滴加任氏液保护标本。
2. 实验过程中，不要改变刺激强度。
3. 实验过程中保证肌肉有适当的休息时间，并不断滴加任氏液保护标本。
来源：丁香实验
