原理
乙酰胆碱在血液中被胆碱酯酶水解，产生醋酸和胆碱。在一定条件下，水解乙酰胆碱的量与胆碱酯酶的活性成正比，故在反应体系中，加入过量的乙酰胆碱使之参加反应， 通过测定剩余的乙酰胆碱量即可计算出被水解的量，从而推算出胆碱酯酶的活性。乙酶胆碱呈色反应：乙酰胆碱可与羟胺作用生成乙酰羟肟酸，后者在酸性条件下与 三价铁离子形成褐色的羟肟酸铁络合物，其颜色的深浅可反映乙酰胆碱含量的多少
材料与仪器
硫酸阿托品 敌百虫 肝素 解磷啶
氯化乙酰胆碱 Ach 蒸馏水 盐酸羟胺 NaOH HCl FeCl ·6H2O HCl Na2HPO4·12H2O KH2PO4
注射器 测瞳孔尺 刀片 采血杯 动脉夹 棉球 恒温水浴 分光光度计 试管架 试管 吸管 加样器 滤纸 漏斗 蛙类手术器械 电刺激器 标本盒
氯化乙酰胆碱 Ach 蒸馏水 盐酸羟胺 NaOH HCl FeCl ·6H2O HCl Na2HPO4·12H2O KH2PO4
注射器 测瞳孔尺 刀片 采血杯 动脉夹 棉球 恒温水浴 分光光度计 试管架 试管 吸管 加样器 滤纸 漏斗 蛙类手术器械 电刺激器 标本盒
步骤
1. 取中试管加磷酸缓冲液 0.85 ml，血样 0.15 ml,置于 37±1 ℃的水浴中预热 3～5分钟。
2. 加入 7×10-3 mol/LAch 溶液 1.0 ml，于 37±１℃的水浴中反应 40 分钟 ( 若反应不充分,可继续反应 20 分钟 ) , 每隔 10 分钟振摇一次。
3. 反应 40 分钟后立即加入碱性羟胺（l mol / L NH2OH·HCl 与 3.5 N NaOH 溶液在 用前 20 分钟等容混合，并不时振荡）4.0 ml。
4. 依次加入 4 N HCl 和 3.7×10-2 mol/L FeCl3各 2 ml,每加一种试剂都要充分振荡。
5. 上述反应液用滤纸过滤，将滤液倒入 1.0 ml 的比色杯中，以 530 nm 的波长比色。
6. 对照管
⑴对照管 1：为无血、无 Ach 的其他试剂空白对照。
⑵对照管 2：为全血及试剂的空白对照，无 Ach。
⑶对照管 3（标准 Ach 值）：为反应系中全量 Ach 的对照：对照管的操作 步骤与样品管相同。
【计算】全血胆碱酯酶活性值以 0.15 ml 全血在 40 分钟内水解 Ach 的μmol 来表示（μmol Ach / 0.15 ml / 40 分钟）。
1. 酶活性值的计算
A1，A2，A3 和 A 样本 分别为对照管 1、2、3 和样品管的光密度值。A3－A1 为单纯 Ach 全量的光密度值,A2-A1 为血液的光密度值,A3+(A2－A1)为 Ach、 血液和试剂的光密度， A3+(A2－A1)－A 样本为分解的 Ach 的光密度值。
2. 酶活性值的百分数计算 样本全血胆碱酯酶活性值
2. 加入 7×10-3 mol/LAch 溶液 1.0 ml，于 37±１℃的水浴中反应 40 分钟 ( 若反应不充分,可继续反应 20 分钟 ) , 每隔 10 分钟振摇一次。
3. 反应 40 分钟后立即加入碱性羟胺（l mol / L NH2OH·HCl 与 3.5 N NaOH 溶液在 用前 20 分钟等容混合，并不时振荡）4.0 ml。
4. 依次加入 4 N HCl 和 3.7×10-2 mol/L FeCl3各 2 ml,每加一种试剂都要充分振荡。
5. 上述反应液用滤纸过滤，将滤液倒入 1.0 ml 的比色杯中，以 530 nm 的波长比色。
6. 对照管
⑴对照管 1：为无血、无 Ach 的其他试剂空白对照。
⑵对照管 2：为全血及试剂的空白对照，无 Ach。
⑶对照管 3（标准 Ach 值）：为反应系中全量 Ach 的对照：对照管的操作 步骤与样品管相同。
【计算】全血胆碱酯酶活性值以 0.15 ml 全血在 40 分钟内水解 Ach 的μmol 来表示（μmol Ach / 0.15 ml / 40 分钟）。
1. 酶活性值的计算
A1，A2，A3 和 A 样本 分别为对照管 1、2、3 和样品管的光密度值。A3－A1 为单纯 Ach 全量的光密度值,A2-A1 为血液的光密度值,A3+(A2－A1)为 Ach、 血液和试剂的光密度， A3+(A2－A1)－A 样本为分解的 Ach 的光密度值。
2. 酶活性值的百分数计算 样本全血胆碱酯酶活性值
来源：丁香实验
