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比色法

相关实验:水杨酸钠的半衰期测定实验

最新修订时间:

原理

水杨酸根与铁离子起反应,形成一种紫色络合物,根据紫色络合物的颜色进行比色得光密度,将光密度代入公式计算得半衰期。

材料与仪器

家兔
水杨酸钠溶液 三氯醋酸溶液 三氯化铁溶液 肝素溶液
试管 离心管 刻度吸管 注射器 721 型分光光度计 离心机 吸管架 酒精棉球 干棉花 竹签

步骤

1.  取兔一只,称体重,用经0.5%肝素湿润过的注射器从兔心取血2 ml(作对照血样),然后从耳静脉注入10%水杨酸纳溶液1.5 m/kg(150 mg/kg)。

2.  注射药后5分钟和35 分钟再从心脏取血2ml,将上述三次抽的血分别放入三支预先装有7ml 三氯醋酸的离心管搅拌离心(1500 转/分)5 分钟,使血浆蛋白沉淀。

3.  准确吸取上清液各6 ml 分别置入试管内,每管加三氯化铁溶液0.6 ml(或12 滴)摇匀后即可显色。

4.  以药前管为对照,在分光光度计上,用波长510 nm,1 cm 光径比色皿进行比色,读给药后两管上清液的光密度(x1、x2)。

5.  根据下列公式求半衰期t =1/2
(x1、x2为药后两次血浓度的光密度,t为两次取血间隔时间)

注意事项

⒈  心脏取血:将兔仰卧,以左手拇指在胸骨一侧,食指及中指于胸骨另侧固定心脏,在心尖搏动最明显处将针与胸壁垂直刺入胸腔,当持针手感到心脏搏动时,再稍刺入心脏,然后抽出血液。取血时,宜用7—8 号针头,针头直出直入,勿在胸腔内左右探索。

⒉  为防止凝血,心脏取血时,注射器内先用0.5%肝素溶液湿润。

常见问题

一、测定药物的半衰期有何临床意义?

来源:丁香实验

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