扫描电子显微镜

一、取材

1. 麻醉家兔，解剖暴露支气管，用刃器切取小段支气管，剖开。

2. 再切取2x5 mm 大小的一块管壁，保护要观察的内表面（即粘膜面），并用缓冲液或生理盐水清洗二次。

3. 如粘膜表面有较多粘液时，可用胰酶溶液消化，再清洗。

二、固定

1. 把标本迅速投入固定液中，其固定程序与透射电镜标本同。

三、导电处理

1. 把经锇酸固定的标本清洗后放入2%单宁酸中处理10分钟。

2. 再用双蒸水清洗3次，然后放入1%锇酸中处理30分钟。

四、脱水

1. 把用双蒸水洗过的标本依次放入30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%乙醇中脱水各10分钟。

2. 然后将标本移入乙酸异戊酯中，置换出乙醇。

五、临界点干燥

1. 临界点干燥是扫描电镜标本制备的一种重要干燥方法，它能消除表面张力，使标本在干燥过程中不损伤、不变形。

2. 将标本置入临界点千燥器的密闭标本室中，打开进气阀门，充入液体CO₂，其量不少于标本室容积的2/3。

3. 关闭开关，并升温使达到临界状态（31.4℃，72.8大气压），此时液态与气态界面消失。

4. 加温过程中温度可达40℃，标本室内压力可达80~120大气压，然后缓慢放气，放气时间不应少于2小时。

图1 扫描电子显微镜构造原理及主要部件

六、镀膜

1. 把干燥的标本用导电胶固定在标本台上（注意观察面向上），把标本台放在离子镀膜机阳极载台上。

2. 在低真空下（0.1 Torr）加高电压（1 000~1 200伏）使阴极（金靶）与阳极间形成电场，把残存的气体分子电离，阳离子打向金靶，金原子溅射出来落在标本表面，形成一层金膜。

3. 这不仅保存了组织表面形态，而且电子束射到标本上容易激发二次电子，并有良好的导电性能，可产生质量好的图像。

七、观察支气管纤毛上皮的表面立体超微结构

1. 支气管纤毛上皮表面结构：支气管粘膜表面有许多纤毛，纤毛排列密集，是由纤毛细胞顶端发出的，在纤毛间可见有杯状细胞，在杯状细胞的表面有长短不一的微绒毛。