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酸性磷酸酶的显示实验(酸性磷酸酶的显示实验)

最新修订时间:

原理

Gomori硝酸铅改良法是根据:以磷酸酯为底物,其被磷酸酶水解后释放出磷酸基,在pH5左右和铅盐结合成磷酸铅盐,但磷酸铅无色,须经硫化铵作用使其变成棕黄色至棕黑色的硫化铅沉淀。

材料与仪器

427细胞
丙酮 乙醇 Gomori硝酸铅作用液 甲基绿 硫化铵
温箱 冰箱 显微镜 乳头吸管

步骤

1. 将培养的427细胞在冷丙酮或95%乙醇中固定15~30分钟。

2. 待片干燥。

3. 移入已预热(37℃)的作用液中孵育2小时。

4. 蒸馏水洗。

5. 移入2%醋酸酸化1分钟,蒸馏水快速漂洗。

6. 移入1%硫化铵1分钟,自来水漂洗数次。

7. 必要时用甲基绿复染。

8. 酸性磷酸酶活性结构呈棕黄色至棕黑色。对照:在处理过程中,在作用液中不加入甘油磷酸钠而加入蒸馏水,则呈阴性。

来源:丁香实验

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