原理
微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破坏微丝，改变细胞的形状
材料与仪器
成纤维细胞
PBS Triton X-100 M-缓冲液 戊二醛固定液 考马斯亮兰染液 细胞松驰素B DMEM
光学显微镜 镊子 平皿 载片 吸水纸 恒温箱
PBS Triton X-100 M-缓冲液 戊二醛固定液 考马斯亮兰染液 细胞松驰素B DMEM
光学显微镜 镊子 平皿 载片 吸水纸 恒温箱
步骤
一、方法
1. 在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片，在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养，用作对照。
2. 在有两片的平皿内加100 μg/ml 的细胞松弛素B 4滴继续培养半小时。
3. 将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做染色处理，另一张用培养液洗五次（在平皿内换五次培养液，每次都要摇动），继续培养、观察。两小时后细胞形状恢复，接近正常。
4. 对恢复的盖片与第一张没用药的盖片一同做染色处理。
5. 染色处理
（1）将需染色的盖片放入盛有PBS的平皿内用吸管轻轻吹洗盖片，换液三次，每次3分钟，洗去培养液。
（2）将盖片移入2%Triton X-100液，置37℃恒温箱内处理20~30分钟，以提取骨架以外的蛋白质，使骨架图像清晰。
（3）立刻将盖片移入M-缓冲液，换洗三次，每次3分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。
（4）将盖片移入3%戊二醛固定15分钟。
（5）将盖片移入0.2%考马斯亮兰染液中，染色15分钟。然后小心地用自来水冲洗，空气干燥。
二、结果
1. 光镜观察，微丝聚集成的张力纤维束被染成蓝色。
2. 在没用药的标本上，成纤维细胞多数有突起，微丝沿突起规则排列。
3. 用细胞松驰素B处理的标本，由于微丝被破坏突起缩回，多数细胞形状变圆。
4. 用药处理后又洗去药的标本，由于解除了药的作用，肌动蛋白重新聚台形成微丝，细胞形状恢复正常。
2. 在没用药的标本上，成纤维细胞多数有突起，微丝沿突起规则排列。
3. 用细胞松驰素B处理的标本，由于微丝被破坏突起缩回，多数细胞形状变圆。
4. 用药处理后又洗去药的标本，由于解除了药的作用，肌动蛋白重新聚台形成微丝，细胞形状恢复正常。
来源：丁香实验
