材料与仪器
伤寒杆菌;
邻苯二胺、碳酸钠、碳酸氢钠、PBS、磷酸氢二钠、柠檬酸;
聚乙烯塑料反应板、离心机、摇床、培养箱;
步骤
1、抗原包被
取洁净的聚苯乙烯微量反应板,于每孔内加伤寒抗原 0.1 毫升(用包被缓冲液稀释,蛋白含量 10 微克/毫升),置 37℃ 1 小时,弃抗原液,用洗涤液 3 次每次 3 分钟。
2、加待测血清
于每孔内分别加不同稀释度(如 1:5,1:0,1:20 … 1:80)的待测血清,PBS 空白对照,阴性对照血清,阳性对照血清各 0.1 毫升。置 37℃ 30 分钟,洗涤 3 次。
3、加酶联 A 蛋白
于每孔加酶联 A 蛋白各 0.1 毫升,置 37℃ 20 分钟,洗涤 3 次。
4、加临时配制的底物溶液各 0.1 毫升,置暗处 15 分钟。加 2M 碳酸 1 滴终止反应。
5. 结果判断:
肉眼判断,若颜色于阴性对照相同则为阴性,若较阴性对照深则为阳性,根据颜色深浅以(+)表示。
来源:丁香实验