原理
在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。
材料与仪器
待检血清
巴比妥缓冲液 琼脂粉
微量进样器 打孔器 玻璃板 电泳仪
巴比妥缓冲液 琼脂粉
微量进样器 打孔器 玻璃板 电泳仪
步骤
1. 抗体琼脂板的制备:同单向扩散法,但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05 M 的巴比妥缓冲液。
2. 打孔见下图
图1 火箭电泳抗原孔位置图
3. 将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原(人血清)分别加入各孔中,每孔10或20微升,要求加量准确而不外溢。
4. 把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳,电压4~6伏/厘米,电泳时间1~5小时,直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线,关闭电源。
5. 取下琼脂板,以抗原孔中心为起点,量出各火箭状沉淀线的高度。同单向琼脂扩散法绘制标准曲线,查出待检血清中Ig含量。
来源:丁香实验