火箭电泳

原理

 

抗原在含有抗体的凝胶中进行电泳，在电场作用下，抗原向一个方向移动，在移动的过程中，逐步与凝胶中的抗体结合而沉淀呈火箭状。沉淀峰面积越大，说明抗原量越多，二者呈正相关，因此可用于抗原的定量测定。此法具有敏感性高、快速等优点。

 

 

 

材料与试剂

 

1 ． 0.05mol/L pH8.6 巴比妥缓冲液配成 2 ％的琼脂。

2 ．抗原与抗体

3 ．其它材料同免疫电泳。

 

 

 

操作方法

 

1 ．将 2 ％琼脂煮沸溶化后，放入 60 ℃ 水浴箱中。

2 ．将适量的抗体用 0.05mol/L pH8.6 巴比妥缓冲液稀释至琼脂同样的体积量，放入 60 ℃ 水浴。

3 ．将两者充分混合，立即倒成平板。

4 ．琼脂板冷却后在一侧打孔，孔径 3mm ，孔距 6mm 。

5 ．于孔内分别加入不同浓度的定量抗原。

6 ．电泳 孔端接负板。电流强度 3mA/cm （或电压 10V/cm ），电泳时间 2h~10h 。

7 ．停止电泳，将琼脂板于生理盐水中浸泡 24h ，中间换液数次。

8 ．染色、脱色、干燥同免疫电泳。

9 ．抗体最适量的测定 将已知抗原与抗体以不同浓度梯度进行方阵试验，找出所形成的火箭状沉淀线，轮廓清晰，前端尖窄而闭合的抗体最小量作为抗体的最适用量。

10 ．标准曲线的绘制 以抗体的最适用量制成琼脂板，分别用已知的不同浓度抗原（同一浓度的也必须做一批，以求平均值）进行电泳，泳毕后染色，测其沉淀峰的高度（或面积），然后以抗原量为纵轴，沉淀峰高度（或面积）为横轴，制成标准曲线。

11 ．对照组的设置 在测未知抗原的同时，必须设置已知标准抗原作为电泳对照。

 

 

 

结果判定

 

在已知标准抗原所形成的沉淀峰的高度，在许可的误差范围内，测其待测抗原所形成的沉淀峰的高度（或面积），然后从标准曲线中查出它们相应的抗原含量。

 

 

 

注意事项

1 ．抗原抗体的用量应当预试，抗原太浓，在一定时间内不能达到最高峰，抗体太浓，则沉淀峰太低而无法测量。预试峰的合适高度为 2cm ~5cm 。

2 ．用优质琼脂糖。

3 ．一定条件下，电泳时间要根据峰的形成情况而定。如形成尖角峰形，表示已无游离抗原。如呈钝圆形，前面有云雾状，表示还未到终点。

4 ．把琼脂板置于电泳槽上搭好桥，再加抗原，或启动电源后，电压极低时加样，以免造成基部过宽的峰型。