高效液相色谱-串联质谱法

一、样品制备

1.提取

在室温下，称取（2 ± 0.05）g组织样品于50 mL离心管内，加乙酸乙酯15 mL，涡旋混匀提取3 min，离心10 min（4000 rpm），移取乙酸乙酯层至50 ml梨形瓶中。残渣中加0.1 mol/L NaOH溶液10 mL，混匀，加乙酸乙酯15 mL提取后移取乙酸乙酯层。合并两次提取液，40 ℃下减压浓缩近干，加入乙酸乙酯1.0 mL和正己烷5 mL,使之充分溶解，待净化。

2.净化

用Silica固相萃取柱进行SPE净化。用正己烷5 mL活化固相萃取柱后，上样，先用正己烷 5 mL淋洗，抽干，然后用正己烷——丙酮（6∶4，v/v）5 mL洗脱。洗脱液在40 ℃下 N2吹干，以20％乙腈水溶液1.0 mL溶解残渣，过0.45 μm滤膜，供LC/MS/MS法测定液相色谱及质谱条件

二、色谱条件

1.色谱柱：Thermo Hypersil Gold （150 × 2.1 mm,5 μm）；梯度洗脱见表1，其中A：水（含0.01 %甲酸）；B：乙腈；流速：250 μL/min；进样量：10 μL。

2.质谱条件

电喷雾电离源（ESI），负离子模式；选择反应监控（SRM）扫描模式，喷雾电压：3500 V；离子传输管温度：350 ℃；氮气作为鞘气和辅助气，其中鞘气为40 arb, 辅助气为5 arb，氩气用作碰撞气， 碰撞压力为1.5 mTorr; 选择反应监测（SRM）。

本方法糖皮质激素类药物在猪、牛、羊的肝脏和肌肉，鸡肉，鸡蛋，牛奶中的提取回收率均可达60 - 110 %，满足国内外的最低检出限要求，并且定量定性准确，重现性好。