简介
多聚酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种模拟天然 DNA 复制过程，在体外扩增特异性 DNA（或 RNA）片段的新技术。
原理
本实验是将待检双链 DNA 经 94℃ 高温变性成单链作模板，然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物，引物分别与待扩增 DNA 片段的两端互补，经 55℃ 低温退火，引物与模板互补结合。在 72℃ 条件下，结合于模板上的引物在 DNA 聚合酶的催化下，利用反应体系中的 4 种 dNTP 为原料，按碱基互补配对的方式延伸合成两条新的 DNA 链。所扩增的 DNA 可作为下一轮扩增反应的模板。重复上述循环过程，经过 20～30 个周期后，特异的目的 DNA 可扩增百万倍以上。 PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳后即可观察到特异的扩增条带。
材料与仪器
血清样品；
HBV-PCR 反应液、HBV-DNA 裂解液、阳性模板、溴化乙锭；
PCR 扩增仪、电泳仪、紫外线分析仪；
步骤
一、标本处理
取混匀的血清 20 μl 加 20 μl 裂解液，搅匀后 100 ℃ 沸水浴 10 分钟，最后 15000 rpm / min 离心 3 分钟，取 4 μl 上清待检。
二、加样及 PCR
取反应液一管（使用前稍加离心），加 4 μl 待检上清或阳性对照于底层反应液中，混匀后高速离心片刻，然后置 PCR 仪，设置程序 94 ℃ 预变性 2 分钟，再按 94 ℃ / 30 秒、55 ℃ / 30 秒、72 ℃ / 60 秒扩增 35 个循环。
三、电泳与结果判断
取 15 μl 反应液，经 2% 琼脂糖凝胶电泳（5V / cm）30 分钟后，在紫外灯下观察结果，若 410 bp 处出现橙黄色带，则 HBV 为阳性。
注意事项
1. 反应管中加好所有试剂后，应立即上机扩增，以免形成过多的二聚体。
2. 阳性模板可用阳性血清代替，处理方法同上。
3. 阳性模板及 DNA 提取液使用前需充分融化离心。
4. 反应也的表面为固体封盖剂，电泳取样时从反应管底部洗液。
5. EB 为强致癌物，操作过程应注意防护。
6. 注意无菌操作，以免出现假阳性。
来源：丁香实验
