基因枪法转化小麦实验

下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种，幼穗转化比幼胚盾片转化更有效，如普通小麦品种 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小麦亚族 Triticeae；硬粒小麦品种 T.turgidum ssp 和小大麦（见注 23 和注 24 )。 1. 收集和消毒小麦颖果 ( 1 ) 收集温室生长 10~12 周

1. 准备金粉颗粒 ( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中，加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min，短暂离心 3s，然后弃上清。重复用乙醇洗两遍。 ( 2 ) 加入 1 ml 无菌水，超声波处理 2 min，短暂离心 3s， 然后弃上清。重复一次。 (3 ) 加入 1 ml 无菌水，涡旋振荡重悬。每 50 μl 分装到 1

注意：由于基因枪通过高压使粒子加速到极高的速度，故操作基因枪时应采取适当的安全措施并且佩戴安全眼镜。 在任何使用基因枪转化的实验中，必须设置对照检测分化和选择效率（见注 40) 。 ( 1 ) 根据 PDS-1000/He (见图 4.2 ) 基因枪操作指南操作，将 DNA 包埋的金粉 ( 见第 3.2 节步骤 2 ) 转到组织中。下面的参数是按照标准设置的（见注 41) 。距离 2.5 cm

1. 诱导愈伤 ( 1 ) 基因枪轰击后，将盾片分散转移，每个重复分到 2~3 个含诱导培养基（MS9% 0.5 Dag) 的平皿中，大约 10 个盾片一皿（见注 48)。 ( 2 ) 用封口膜封好平皿，放在 22℃ 黑暗培养诱导愈伤 [见注 4 9 和注 50 ，图 4.1(c) ]。 2. 分化和选择 ( 1 ) 在诱导培养基上生长 3~5 周后，将含有体细胞胚的愈伤组织转移到含有分化