转基因植株的选择实验

植物学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

外源基因整合到宿主细胞的概率低且随机发生，加之这些极少的转基因细胞很难再生获得完整植株，因此，转基因试验中利用选择标记基因已成为常态。对于那些不用于田间栽培的转基因研究而言，通常选用高抗除草剂或抗生素的选择标记。本实验来源「麦类作物转基因技术与田间鉴定实验指南」〔英〕H.D.琼斯 P.R .休里主编。

来源：丁香实验

操作方法

转基因植株的生长和选择

1. 将可能含有转化细胞的幼胚盾片置于愈伤诱导培养基上培养产生愈伤组织，诱导培养基中添加 0.5 mg/L 2 , 4-D 和 10 mg /L AgNO3。对农杆菌处理过的培养物，培养基中还应加入 2 mg/L 毒莠定和 160 mg/L 特美汀，愈伤组织诱导培养在黑暗条件下进行，同时在这一阶段可加入选择剂 2~6 mg/L 草铵膦。 2. 3 或 4 周后将愈伤组织从诱导培养基转移至第一轮

转基因植物的分析

一、PCR 分析 1. 当植株长到合适大小时（即 3 ~4 张叶片），取约 2 cm 长的叶片，立即放于液氮中，抽提基因组 DNA。 2. 在液氮中将叶片磨成粉末状，并使用 Wizard 基因组 DNA 纯化试剂盒提取基因组 DNA。 3. 为了确定是否为转基因植株，利用 bar 基因引物 1 和引物 2 对 DNA 做 PCR 分析，退火温度为 57℃。 4. 将 PCR 阳性植株移栽到