实验15 植株硝态氮的比色测定

实验15 植株硝态氮的比色测定

原理

　　硝酸根经还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸，a－萘胺结合，生成玫瑰红色的偶氮染料，其颜色深浅与硝态氮含量在一定范围内成正比关系。主要化学反应如下式：

仪器药品

　　比色计 　　　　　　离心机

　　研钵 　　　　　　　容量瓶

　　50ml大试管　　　　 移液管

　　烧杯　　　　　　　 离心管

　　20%醋酸溶液：取20ml分析纯冰蜡酸加80ml水。

　　混合粉剂（所有药品用AR级）：

　　硫酸钡100g a－萘胺2g

　　锌粉2g 对氨基苯磺酸4g

　　硫酸锰10g 柠檬酸75g

　　硫酸钡用离子水洗脱杂质，烘干。上述各药品分别研细，再分别用等分的硫酸钡和其他各药品混合，然后再把所有各药品混合在一起，使混合粉剂成为无颗粒状灰白色的均匀体。配制粉剂就在干燥洁净环境中进行。若空气湿度偏高，则混合粉剂成淡玫瑰红色；若药品不纯也会造成此现象，降低测定灵敏度。配好的粉剂应保存在黑暗干燥条件中，7天以后即能应用。存放条件良好，可存数年，其测定稳定性比新配的更佳。

操作步骤

　　1．绘制标准曲线

　　取恒重NaNO₃ 0.6071g溶于1000ml水中，配成100μg/ml硝态氮溶液。随后稀释成2、4、6、8、10μg/ml。分别吸取2ml转入50ml有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml，再加0.4g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量地倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉膜即可去除。离心5分钟(4000r/min)，取清液在520nm下比色测定，绘制标准曲线。方法适用范围在20μg以内。

　　2．组织液的提取：称取棉花功能叶柄0.5g，剪成1梍2mm碎片，于研钵中加少量蒸馏水研磨，移于干燥的三角烧瓶中，加入蒸馏水20ml，振荡1梍3分钟，放置澄清后（或离心之），取上清液2ml，再按标准曲线制作方法测定硝态氮。叶柄中硝态氮含量根据下列公式计算：植物组织中硝态氮含量(

　　μg/g)=C·V式中

　　C为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮浓度(μg/ml)，V为1g植物组织所制备的提取液总体积(ml)，如本方法为40ml。