用于表达监测的寡核苷酸分析实验

实验分类：

遗传学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

介绍了用于表达调控研究的 mRNA 的准备，包括制备、纯化和定量标记用于寡核苷酸分析的 cDNA 探针的方法。本单元还描述了几种处理和标准化基因表达原始数据的方法，以用于聚类分析和进一步的分析。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案1 用于表达监测的 mRNA 的扩增及其与寡核苷酸分析芯片的杂交

基本方案2 数据分析与处理以及数量评定

1.用 Affymetrix Gene Chip 软件进行最初的数据处理。通过检测图像像素值，此软件测定每种寡核苷酸探针的荧光强度从而计算出每种转录本的简化值。此简化值被称为「平均差异」，它通过确定某一特定转录本在所有引物对中的特异信号而得（即将某一特定转录本由完全匹配的寡核苷酸引物所产生的信号值减去其由不完全匹配的寡核苷酸引物所产生的信号值)。平均差异值与某一特定转录本在所有转录本中的比例呈正比