蛋白质浓度分析实验

一、标准 Bradford 分析 1. 准备 3 份标准品（用水稀释），BSA 浓度为 0.2~0.9 mg/ml，IgG 浓度为 0.2~1.5 mg/ml。一般设定 4 个或 5 个浓度比较合适。如果样品中蛋白质浓度可能超过分析范围，那么应用样品缓冲液相应稀释。分析的样品至少为双份。 标准蛋白质：使用纯化蛋白质作为相对标准；BSA 或 lgG 试剂盒能够买到（如从 Bio-Rad )。用去

1. 按标准 Bradford 法制备标准品。 2. 取 50 份试剂 A 与 1 份试剂 B 混匀（在室温下至少稳定一天）。 3. 分別吸取 100 μl 样品和标准品置各自试管。每个试管加 2 ml 试剂，混匀，在 37℃ 保温 30 分钟。 4. 样品冷至室温，在 562 nm 处读取吸收值（用双波长分光光度计时以水作对照）。 5. 平均所获得的数据并按上述方法制作标准曲线。

1. 对 500 μl 的样品（至少 5 μg/ml），加 50 μl 的 TCA ( 100% ) 并振荡。 2. 把样品置于冰上 30 分钟（或者置于冷藏箱中 15 分钟），然后 10000 g 离心 5 分钟。 3. 倾去上清液并仔细吸干，然后在用合适缓冲液重新溶解前，用 500 μl 丙酮洗涤沉淀 2 次。