中间丝的分离方法实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

从培养的细胞中分离Ⅰ~Ⅲ型中间丝

1. 从培养皿或瓶中吸去培养基并用 5 ml 含蛋白酶抑制剂的冰冷的 PBS 洗细胞。 2. 每 75cm2 瓶或培养皿用 1 ml 冰冷的裂解缓冲液 5 分钟裂解细胞。裂解缓冲液：在 PBS 中加入： 1% Triton -X-100 0.6 mol/L KCl 10 mmol/L MgSO4 3. 每 ml 细胞裂解液加 0.5 mg DNA 酶Ⅰ，4℃ 冰浴 5 分钟或

从组织中分离中间丝

一、从牛舌上皮分离角蛋白中间丝 1. 从当地屠宰场拿到新鲜牛舌。一条舌头通常可以产出几十毫克纯化了的角蛋白中间丝。 2. 用刀片切刮，把舌中的肌肉和黏膜分开。舌黏膜片（大约 1cmx1 cm ) 于 4℃ 在含 20 mmol/L EDTA 和蛋白酶抑制剂的 PBS 中浸泡过夜。 3. 用镊子把表面的上皮从下面相连的组织中拉走。 4. 用解剖刀片把上皮切成小块，在解聚缓冲液（每克上皮用 2