对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性

1. 准备该显微检测所需的盖玻片： (1) 盖玻片在 200 μg/ml 聚赖氨酸溶液中室温过夜。 (2) 玻片在盛有 15 ml 蒸馏水的培养皿中翻转洗涤 4 次，每次 10 分钟。 (3) 洗过的盖玻片风干并存放在无灰尘的容器中直到使用。 2. 用含 1 mmol/L 的 PME 缓冲液 300 倍稀释羧基化了的乳胶珠，得到 2.5% 的悬浮液。 3. 在含 2 mmol/L ATP

通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性

1. 在一个培养皿里堆一些潮湿的滤纸片，放一块盖玻片到上面。加 50 μl 含运动蛋白的溶液到盖玻片的表面并涂开。盖上盖子在室温放 5~10 分钟，使蛋白黏附在玻璃上。 2. 转移盖玻片，用室温的含 2 mmol/L ATP 前的 PME 缓冲液冲洗，并用 valap 封住前后。 3. 在盖玻片和载玻片之间灌 50 μl 紫杉醇稳定的微管溶液（0.5 mg/ml )，微管可以是通过盐抽提紫杉醇