纯化非肌肉肌球蛋白实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

细胞匀浆

1. 准备下面的贮液和材料。等渗的缓冲盐溶液（例如 PBS，150 mmol/L NaCl；10 mmol/L NaPO4，pH 7.2) 二异丙基氟瞬酸（DIFP） 1 mol/L 咪唑-HCl，pH 7.0 0.5 mmol/L K+EGTA，pH 7.0 0.1 mol/L K+ATP，pH 7.0 0.1 mol/L DTT NaN3 蛋白酶抑制剂 PMSF 抑胃酶肽

非肌肉肌球蛋白的层析纯化

高速离心和 DEAE 层析 1. 用不含除了 PMSF 以外的蛋白水解抑制剂的匀浆缓冲液平衡 DEAE 纤维素，取 50 ml 装到 2.5cm x 35cm 有合适管路的柱子上。 2. 准备总体积为 0.8 L，线性梯度为 0~0.5 mol/L KCl 的匀浆缓冲液。 3. 用大容量转头（例如 Ti 647.5，它带 6 个 70 ml 容量的聚碳酸酯桶）以 43000 r/min，13