桥粒的制备实验

1. 在当地屠宰场获取新鲜的牛口鼻部或舌头，立刻埋于碎冰中。 对于口鼻部：用剃刀刮掉口鼻部最外面的一层（角质层的角膜），收集下面的一层（棘层）。 对于舌头：从结缔组织的上面分解出表皮。 2. 用剪刀将解剖来的表皮剪成 0.5 cm X 0.5 cm 的碎片。用一个 Polytron 匀浆器匀浆表皮，每 10 g 组织加 200 ml 含 0.05% NP-40 的柠檬酸缓冲液。在 4℃ 搅拌

1. 在最终的桥粒沉淀中加 20 ml 尿素溶液，用玻璃/Teflon 匀浆器匀浆，用尿素溶液稀释匀浆物使蛋白质浓度为 0.15 mg/ml，用 1 mol/L 的 Tris-HCl 调节溶液的 pH 值到 9.0 在室温至少搅拌 1 小时。 尿素溶液： 10 mmol/L Tris-HCl ( pH 9.0) 9 mol/L 尿素 0.2% β-巯基乙醇 5 μg/ml 亮抑蛋白酶肽