细胞膜的制备方法实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

从悬浮细胞中制备细胞膜

一、用胶原酶/EDTA 释放细胞 1. 用预保温溶液洗涤单层细胞并用胶原酶处理 (1) 预保温溶液洗涤细胞。预保温溶液： 5 mmol/L EDTA 钠盐溶于 HBSS，不含二价阳离子。 (2) 在单层细胞上加 1% 的胶原酶溶液，在 37℃ 保温 30 分钟，偶尔摇动。 1% 胶原酶： IV 型胶原酶（Sigma ) 溶解在含 1 mmol/L CaCl2 的 1% 的 BS

从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基底膜或中间膜

1. 制备下列溶液： (1) 包被缓冲液（CB） 20 mmol/L MES 135 mmol/L NaCI 0.5 mmol/L CaCl2 1 mmol/L MgCl2 pH 5.5 (2) 1% 溶于 CB 缓冲液的阳离子硅胶 (3) 溶于 CB 的 1 mg/ml PAA 用 NaOH 和 pH 试纸调节 pH 值到 5.5。 (4) 含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液 (

从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜

1. 准备下列仪器：微型离心机临床台式离心机超离心机吊桶式转头和合适的离心管振荡器尼龙单丝网，孔径约 50 μm 探头超声仪 2. 将微载体培养物转移到 50 ml 的锥形离心管中。 3. 用无血清培养基或含有 Ca2+ 和 Mg2+ 的 PBS 溶液洗涤微载体上的细胞两次。 4. 用冰冷 CB 洗涤细胞一次。 5. 微载体在 1 g 重力下下沉的过程中，锥形离心