用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验

1. 在离心管里配制 50 μl 反应混合物： 5X 酪氨酸激酶分析缓冲液 10 μl 10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液 5 μl [γ-32P] ATP（终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP) 5 μl 水（取决于下一步所加的激酶样品的量） 0~30 μl 5X 酪氨酸激酶Ⅰ和Ⅱ分析缓沖液 100 mmol/L Tris-HCI，30℃ 时（pH 7.5) 25 m

1. 准备 P81 磷酸纤维素滤纸。 (1) P81 磷酸纤维素滤纸切成 2cmX2cm 的方块，折起一个角，用铅笔在这里做个记号。 (2) 将膜块放在一大张非吸收性材料上，如有机玻璃或者盖着铝箔的纤维板。 2. 设置和标记进行分析反应的离心管。 反应体积可以是 25~100 μl。对于 50 μl 反应，加入下列溶液： 10X 反应缓冲液 5 μl