蛋白质磷酸化的测定实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

代谢标记

1. 用 60 mm 或 100 mm 培养瓶，在完全培养基中培养细胞至所希望的密度。 2. 用预热的低磷酸培养基（无放射性磷酸盐）冲洗两次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培养基（50~100 μmol/L 无机磷酸）。 3. 培养结束后，回收 32P 标记培养基，用 10 ml Aquasol (NewEnglandNuclear) 或 Ecolume(ICNBiome

X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质

1. 单向或双向凝胶电泳分辨 32P 标记的样品。 2. Whatman 3MM 滤纸上或者两张塞璐玢膜（Bio-Rad) 之间吸干凝胶。用放射性墨水在凝胶边缘标几个点。 3. 完全黑暗或安全光（用柯达 GBX-2 或 6B 滤光片遮光）下，在 X 射线片曝光夹里，将柯达 X-OMAT-AR 胶片放在凝胶与增感屏（DuPont Cnone) 之间。确保胶片与凝胶及增感屏的闪烁体面紧密接触。如果