脱落细胞单细胞悬液的制备

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在临床工作中，可以收集到大量自然脱落细胞，这些细胞标本经过简单处理，便可成为较好的单细胞悬液供流式细胞术分析。主要包括脱落细胞、胸腹水细胞、尿液、内镜刷检细胞等。本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」王书奎、周振英主编。

来源：丁香实验

操作方法

食管拉网细胞的单细胞悬液的制备

1. 将食管拉网器上的细胞洗脱到 20 ml PBS 液中，以 1500 r/min 离心后，再用 PBS 液洗 2 次，离心 500~800 r/min，1~2 min，弃上清。 2. 再加入 PBS 液 5 ml，以 300 目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清。 3. 加少许 PBS 液混匀沉淀细胞，加固定液或低温保存，备用。

尿液脱落细胞的单细胞悬液的制备

1. 用一清洁器皿收集 24 h 尿液，置 4℃ 冰箱中自然沉淀 2 h，轻轻倒去上清液，留下少许带细胞的沉淀物，用吸管移至 10~20 ml 离心管中。 2. 500 r/min 离心 10 min，去上清。 3. 加 PBS 液 8~10 ml，以 1000 r/min 离心 10 min，去上清；重复再洗 1 次。 4. 再加 5 ml PBS 液混匀，用 300 目尼龙滤网过滤，离心

胸、腹水脱落细胞的制备

1. 抽取胸、腹水 50~100 ml，加入 1000 U/ml 肝素液 1 ml，放盐水瓶中置于 4℃ 冰箱中静置 6~12 h，弃去上清。 2. 将底部 10~20 ml 用长吸管移入试管中，用 PBS 液洗 3 次，以 1500 r/min 离心沉淀 5 min。 3. 再加 5 ml PBS 液混匀，用 300 目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清。 4. 少许 PBS 液，混匀；加固定液

冲洗液细胞样品的制备

1. 用 300~500 ml 生理盐水冲洗膀胱，冲洗一定时间后，吸出冲洗液放入容器中于冰箱内置 6~12 h。 2. 取沉淀液 20~40 ml，离心沉淀并以生理盐水洗 2 次，吸上清。 3. 加 10 ml PBS 液，混匀；以 300 目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清。 4. 过滤后 1000 r/min，10 min，离心沉淀，去上清；加固定液或低温保存备用。