细胞分离纯化技术

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

细胞纯化可根据其大小、密度、表面荷电、吸附能力或表面抗原的差异而采用密度梯度沉降法、细胞电泳、贴附、亲和层析、花环形成、补体介导杀伤溶解以及流式细胞仪（FCM）等方法来进行纯化。（来源：医学基础免疫学实验指导，主编金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界图书出版社，1990）

来源：丁香实验

操作方法

Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞

1. 在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。　　 2. 取肝素抗凝静脉血与等量Hank's液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000 rpm×20 分钟。　　 3. 离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank's液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带，单个核细胞包

Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞

1. 不同浓度（密度）Percoll溶液的制备先用9 份Percoll与1 份8.5 ％ NaCl或1.5 MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液（0.85 ％ NaCl或0.15 M PBS）稀释到所需浓度。 Percoll浓度（％）　70　　　60　　　 50　　　40　　 30　　　 20 比重（g/ml）　　1.090 1.077 1.067