目的基因在真核系统中的表达及细胞内的定位实验

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验是将氯化钙，DNA和磷酸缓冲液混合，形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒（沉淀），磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质，并以GFP标记分子最常作为标记物来追踪结合分子的表达水平和定位，或作为检测环境变化或蛋白相互作用的指标。内容来源：中国医科大学实验指导手册。

来源：丁香实验

操作方法

磷酸钙法瞬时转染法

1. 转染的前一天在35 mm培养皿中植入细胞（约1×106个细胞），使得第二天转染时细胞汇合率达到50-80%； 2. 转染前1-4小时，换成不含血清和双抗的培养基； 3. 在1. 5 ml无菌的离心管中混合下列药品： 15. 5 μl 2 MCaCl2，最多10 μg质粒DNA，补加TE(pH8. 0)至125 μl； 4. 在无菌的35 mm平皿中

荧光法

取转染后24-72 hrs的细胞，置于倒置荧光显微镜下观察含有目的基因的EGFP融合蛋白的亚细胞定位。