培养细胞标记和裂解物的制备实验

1. 培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞： 2a. 吸去培养液，用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液，吸尽该培养液。 3a. 加入预热的标记培养液，加入量为：0.5~1 ml/35 mm 培养皿，1~2 ml/50 mm 培养皿，或2~4ml/ 100 mm 培养皿。 对于非贴壁细胞： 2b. 1 800

1. 标记和洗涤细胞（温和去污裂解法，步骤1~7）。 2a. 对于贴壁细胞：加入适量SDS裂解液至培养皿中。（35 mm 培养皿加0.1 ml，50 mm 培养皿0.25 ml，100 ml 培养皿0.5 ml）立即用橡皮细胞刮于刮下细胞并转移至带螺口盖的微量离心管中。 2b. 对于非贴壁细胞：在旋涡混合器上短暂振荡细胞沉淀使之松散，加入1 ml SDS裂解缓冲液（毎5×107