病毒的血清学实验

1. 取一块洗净晾干的20 孔凹窝塑料板，用蜡笔做好标记。用带有橡皮吸头的吸管，于1～6 孔内各加人生理盐水0.2 ml，在第1 孔内加入已经稀释成1：5 的流感病毒尿囊液0.2 m1，混匀后吸出0.2 ml 至第2 孔，再混匀后吸0.2 ml 至第3 孔，如此稀释到第8 孔（病毒稀释度即分别为1：10～1280），自第8 孔吸出0.2 ml 弃去（弃于消毒缸中），第9 孔不加流感病毒尿囊液，作

1. 取干净凹窝塑料板一块，用蜡笔做好标记，用带有橡皮吸头的吸管，于第2 至第9 孔内各加人生理盐水0.2 mL； 2. 于第1 ，第2 及第9 孔中各加入稀释成1：5 的流感病人发病早期血清0.2 ml （血清处理见附录），混匀后，从第2 孔吸出0.2 ml 加入第3 孔，按同法稀释至第8 孔，吸出0.2 ml 弃去（血清稀释度分别为1：5~1：640）。 3. 在第1 至第8 孔中，各加入

1. 用包被液稀释豚鼠抗兔IgM 抗体至l0 （g/ml，加至40 孔板，每孔0.2 m1。置湿盒37 ℃1 小时，再置4 ℃过夜。用洗涤液洗三次。 2. 用稀释液稀释待检血清，然后加至40 孔板，每孔0.2 ml。置湿盒，37 ℃1 小时，用洗涤液洗三次。 3. 用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50 个血凝单位，对照抗原用同法稀释。分别加入40 孔板中，每孔0.3 ml。置湿盒4 ℃过夜，用洗涤

取冷存的EB 病毒抗原靶细胞涂片置室温中吹干。 用0.01 M，pH7.4 PBS 将即检血清作1：5，1：10 ，1：20 稀释，将各稀释度血清滴加至细胞涂片的小圆穴中，勿使液体外溢。 置于湿盒中在37 ℃温箱作用30 分钟，用同一PBS 浸洗三次，每次5 分钟，末次浸洗后在室温中吹干。 滴加酶标抗体于各小圆穴内，置湿盒中在37 ℃作用60 分钟，同上法浸洗三次。 将新鲜配制的底物溶液滴

将已经处理的待检尿液混合于人胚肺纤维母细胞（HEL）中，然后用4 号针头滴加于印有小孔的灭菌玻片上，放CO2 孵育箱中，37 ℃短期培养（48～72 小时）制抗原滴片。 取出抗原滴片，冷丙酮固定30 分钟。 用0.0l mol/L pH7.8 PBS 漂洗一次，滴加一定稀释度的HCMVAb-20 K 37 ℃孵育2 小时。 取出抗原滴片再用PBS 冲洗三次，吸干滴加FITC 标记的羊抗人Ig