病毒的培养方法实验

1. 鸡胚的检查 将9～11 日龄鸡胚置于检卵器上，照视观察鸡胚是否生活，根据①小血管是否清晰；②胚胎是否活动，观察小鸡的眼睛黑点是否移动。如果鸡胚不动，血管昏暗模糊，变黑或苍白都表示已死亡。 2. 接种 用铅笔标明天然气室及鸡胚位置，然后在绒毛尿囊膜发育区〈照视时呈现红色〉近胚位处的气室边缘作一记号，定为注射入口。 用碘酒消毒注射入口和天然气室端的蛋壳，再用电钻，口腔科用牙钻和小锉刀，于

以无菌0.25 毫升注射器抽取脑炎病毒悬液0.1 毫升，去除注射器内的气泡。 取出小白鼠，左手将小白鼠固定，固定时用大拇指和食指握住小白鼠的头部，左手手掌轻轻按住小白鼠的体部，使其俯卧在桌面上右手以灭菌棉签蘸以碘酒，消毒小白鼠的右侧颞部皮毛。 右手拿注射器在小白鼠颞部（眼与耳根连线的中点略偏耳朵的方向）剌入，进入颅腔进针2～3 毫米，不要插得太深，注射量为0.02～0.03 毫升（不可超过0.

1. 原代细胞单层培养 原代细胞单层培养法，是指动物（包括脊椎动物和无脊椎动物）的组织自机体取出后，经胰酶或其他细胞分散剂消化处理，得到单个细胞悬液。以一定量接种到特定容器中，加入细胞生长所必需的营养液，置合适温度中经一段时间的培养，分散的单个细胞即贴附玻壁，开始分裂增殖并逐步长成均匀致密的单层细胞。 （1）取鸡胚：用碘酒棉球消毒气室端卵壳，再以酒精棉球消毒，然后以无菌镊子打开气室端卵壳，除去

将成片细胞的生长液倒掉，用Hank's 液洗一次。 加入适量的0.1～0.25% 胰蛋白酶，37 ℃孵育1 分钟。 将细胞倒放，细胞在上，胰酶在下，继续孵育37 ℃5～10 分钟。 将胰蛋白酶倒掉，再加入原量的生长液，用10 毫升吸管吹打分散细胞。 用生长液按原量3-4 倍稀释，即一瓶细胞能传3-4 瓶。 病毒接种及CPE 观察： ①取已长成单层细胞的培养瓶二只，用无菌毛细滴管吸去管中