质粒DNA高频转化大肠杆菌实验

实验分类：

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

制备好感受态细胞后，接下来就是质粒DNA转化入大肠杆菌细胞的过程。但要注意的是感受态细胞最好是新制备的，因为保存一定时间的感受态细胞会使转化率降低；此外DNA的浓度也要注意，不能太高。

来源：丁香实验

操作方法

高频法

1、取新制备的一管感受态细胞。 2、取0．03 ml感受态细胞转和4 ng质粒DNA混匀，置冰浴30min 3、将 Ep管置于42 ℃水浴中热冲击2分钟，立即置于冰上1分钟。 4、在 Ep管中加70 ul LB培养基混匀，37 ℃培养30min 5、涂在含适当浓度抗生素的LB平板上。 6、37 ℃培养过夜，长出的菌斑既为阳性克隆。