干细胞的鉴定实验

透 射 电 镜 样 品 制 备 技 术 为了满足透射电镜观察的要求，超薄切片必须做到以下几点：①切片能够耐受电子 束 的照射，在热和高真空条件下有一定的稳定性。②细胞的超微结构保存良好，尽量减少人工假象。③ 切 片 厚 度 一 般 在 60〜80nm 为 宜 。切片太薄可得到较高的分辨率，但 反 差 弱 ；切片太厚，又会出现结构重叠，分 辨 率 低 ，甚至会出现电子束不能穿透切片

扫 描 电 镜 样 品 制 备 方 法 取材 取材的要求基本与透射电镜相同，但观察样品面积可大些 [(l-l.5) mm x (3〜5)mm 。 清洗 组织表面如覆盖有黏液、分泌物 (如 气管、肠等) 或有一些杂物 (如胃表面除有分泌物外还有未消化的食物等) 的样品，需经过充分清洗后方可固定，否则将会影响电镜观 察 。 清洗方法：对表面覆盖有杂物的

免 疫 电 镜 胶 体 金 标 记 技 术 免疫电镜技术是利用抗原抗体特异性结合的原理，在细胞超微结构水平上定位、定性和定量，原位显示抗原大分子的技术。 1971 年 Faulk 等将胶体金标记抗体技术应用到电镜中，开始了免疫电镜胶体金标记技术。该技术的优点是：胶体金颗粒致密，易于辨认 ；定位比酶标记反应物更精确，同时还可以做定量分析；由于金颗粒直径的不同 (适合电镜的金颗粒直径

流 式 细 胞 仪 检 测 分 析 技 术 实 验 材 料 (1) 不同来源的干细胞，细胞数不少于 5xl0 5 个/管。 (2) 荧光标记的抗体或抗体及荧光二抗。 (3)PBS。 实 验 步 骤 (1) 将 细 胞 用 PBS 充分洗涤后重悬于 5000 PBS 中，如果细胞收集和鉴定不能同天完成，可将充分洗涤后的细胞重悬于 Iml 80