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简介
三酰甘油脂肪酶,三酰甘油酰基水解酶。
三酰甘油 → 甘油 + 长链脂肪酸
游离羧基的释放引起 pH 的降低,而这可以用来鉴定酶的活性。在实验期间,为了保持一个稳定的 pH,建议 pH 稳定计与自动滴管连接,或者用从合成的底物上释放一个具有荧光的残基,根据其荧光光度测定活度。
来源:《酶学实验手册》
来源:丁香实验
操作方法
实验混合物:5 ml 橄榄油-阿拉伯树胶乳胶5 ml H2O2 m l 3.0 mol/L NaCl1 ml 0.075 mol/L 氯化钙2 ml 0.5%BSA(酵母脂肪酶)或 0.027 mol/L 牛磺胆酸钠(猪脂肪酶)15 ml,调至 pH 8.0空白对照:记录约 3 min 内,每次自动滴定器加入的滴定标准液的量。样品:在实验混合物中加入合适量的稀释酶(根据活性),并记录约 5 min
荧光分析法0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.00.05 mmol/L 联丁酰荧光素 [Mr=472.5;溶解 2.36 g 于 5 ml 乙烯基乙二醇一甲醚(甲基溶纤剂)中,95 ml 0.1 mol/L Tris-HCl pH 8.0 作为底物溶液]配成 2.9 ml 底物溶液需用 0.1 ml 底物样品。在 470 nm 激发,于 510 nm 处测量到荧光。
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