脂肪酶的测定实验

实验分类：

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

三酰甘油脂肪酶，三酰甘油酰基水解酶。

三酰甘油 → 甘油＋长链脂肪酸

游离羧基的释放引起 pH 的降低，而这可以用来鉴定酶的活性。在实验期间，为了保持一个稳定的 pH，建议 pH 稳定计与自动滴管连接，或者用从合成的底物上释放一个具有荧光的残基，根据其荧光光度测定活度。

来源：《酶学实验手册》

来源：丁香实验

操作方法

pH 稳定计（自动滴定器）法

实验混合物：5 ml 橄榄油-阿拉伯树胶乳胶5 ml H2O2 m l 3.0 mol/L NaCl1 ml 0.075 mol/L 氯化钙2 ml 0.5％BSA（酵母脂肪酶）或 0.027 mol/L 牛磺胆酸钠（猪脂肪酶）15 ml，调至 pH 8.0空白对照：记录约 3 min 内，每次自动滴定器加入的滴定标准液的量。样品：在实验混合物中加入合适量的稀释酶（根据活性），并记录约 5 min

荧光分析法

0.1 mol/L Tris-HCl，pH 8.00.05 mmol/L 联丁酰荧光素［Mr＝472.5；溶解 2.36 g 于 5 ml 乙烯基乙二醇一甲醚（甲基溶纤剂）中，95 ml 0.1 mol/L Tris-HCl pH 8.0 作为底物溶液］配成 2.9 ml 底物溶液需用 0.1 ml 底物样品。在 470 nm 激发，于 510 nm 处测量到荧光。