蛋白质与核酸的紫外交联实验

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

用紫外线照射蛋白质核酸复合物，在核酸核蛋白紧密接触的地方能引起共价键形成，从而选择性地标记了与DNA识别位点特异性结合的DNA结合蛋白。由于标记物从核酸到蛋白质的传递，因此可对粗制混合物中的DNA结合蛋白的分子质量进行快速和可靠的测定。来源：《精编分子生物学实验指南》第五版

来源：丁香实验

操作方法

用溴脱氧尿苷（BrdU)取代的探针进行紫外交联

1）将10μL含有高亲和性蛋白结合位点的目的序列的单链M13载体与等摩尔的17 bp M13通用引物混合。用1×限制性内切核酸酶缓冲液（50 mmol/L NaCl)将终体积调至100μL。90℃加热5min，在室温下冷却过夜。2) 将下列反应物加入杂交混合物中：50μL [α32P] dCTP (3000 Ci/mmol)3.5μL 50× dNTP/BrdU 溶液1.75μL 0.1 mol/