最新修订时间:
简介
来源:《精编分子生物学实验指南》第五版
来源:丁香实验
操作方法
1)于 4℃ 不断搅拌,往 2 体积的抗血清、腹水或组织培养上清中,逐滴加入 1 体积 SAS 溶液。加完后置于 4℃,不间断地搅拌 2〜4 h 以形成沉淀。2)4℃ 12 OOO g 离心 20 min, 用预冷的溶于 PBS 的 33% SAS 溶液在涡旋混合器上振荡洗涤沉淀,所用溶液的体积与原抗血清、腹水或组织培养上清等体积,重复洗涤。3)在涡旋混合器上温和振荡将沉淀溶于合适的预冷的缓冲液中
DEAE-Affi-Gel Blue层析法分级分离IgG1)根据制造商的说明准备DEAE-Aff1-Gel Blue柱子。于4℃用5倍柱床体积的加样缓 冲液平衡(7 mL柱床体积/mL抗血清或腹水)。2)于4℃下透析含1g的样品40 h,中间换2次加样缓冲液(每次换大约4 L)3)加样上柱,速度为10 mL/h。以同样的速度用3倍柱床体积的加样缓冲液洗脱未结 合的蛋白质。4)用洗脱缓冲液以10 mL/h的速度洗脱结合的1gG组分。以10 mL为一组分分
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