非同位素标记探针的酶法检测实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

杂交的探针也可通过酶学反应进行检测，它可在杂交的部位产生有色的沉淀，最常用的酶是碱性磷酸酶（AP）和辣根过氧化物酶（HRPO），将载玻片与适当的酶底物温育反应，便可观察探针杂交的部位。

来源：丁香实验

操作方法

辣根过氧化物酶法检测

1. 以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片（“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步）。 2. 由1×SSC中取出玻片，尽可能吸去残留玻片上的缓冲液，但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻片上，放24 mm×60 mm 的盖玻片于封阻液上，将载玻片放于裹以铝箔的加湿盒中，置37℃温育30 min。 3. 从加湿盒中取出玻片，倾斜使盖玻片滑掉，尽可能吸去残留封阻液，但不使玻片干

碱性磷酸酶检测法

1. 生物素酰化探针与切片杂交、洗涤、封闭，然后与链亲和素溶液温育（“辣根过氧化物酶法检测”，步骤1~4）。 2. 由0.1% Tween 20/PBS中取出玻片，吸去残液，勿使玻片干燥，加200 μl 生物素酰化碱性磷酸酶溶液于玻片上，加盖24 mm×60 mm 盖玻片。放入外裹以铝箔的加湿盒中，置37℃温育30 min。 3. 从加湿盒中取出玻片，倾斜使盖玻片滑去，将