杂交信号的放大实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

必要时可对生物素和地髙辛标记探针的杂交言号进行放大。信号放大过程可在杂交洗涤后的任何一步进行，包括在观察结果后，旦可重复进行。

来源：丁香实验

操作方法

生物素酰化信号

1. 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤，进行第一轮杂交信号检测。 2. 如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油，移去盖玻片，并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于0.1%Triton X-100/4×SSC 15 min，并轻摇。盛液的Coplin 广口瓶外裹以铝箔以避光，如盖玻片不易松动，应小心去除，重复洗涤2次。 3. 吸去载玻片上残余溶液，在载玻片

地高辛标记探针的信号

1. 用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片（见“荧光原位杂交实验”基本方案步骤1~6）。 2. 加50 μl 10 μg/ml的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上，盖以22 mm2 大小的Parafilm 膜，置37℃温育30 min。 3. 移去Parafilm 膜，分别在4×SSC、0.1% Triton X-100/4×SSC、4×SSC中洗片，每次15 min。