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兔多克隆抗血清的制备实验

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,这就是免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

来源:丁香实验

操作方法

兔多克隆抗血清的制备实验

1. 取2 ml 的弗氏完全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射针头,排出注射器中的气泡。 2. 将兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的颈背部毛皮,另一只手托住兔的后腿及臀部,将兔束紧固定以使后肢不能伸张,用70%乙醇对所要注射的区域进行清洁消毒,在后肢大腿肌肉内进针约1 cm 深,毎条大腿肌肉内最多注射0.5 ml 乳化液。

备选方案1(皮内注射免疫法)

1. 按基本方案中步骤1制备免疫兔用的抗原。 2. 牢牢地抓住兔子,剃除其背毛,用70%乙酵消毒其暴露的皮肤。用拇指和食指将需要免疫注射的区域的皮肤张开,用3 ml 注射器带24G注射针头以相对皮肤30。的角度进针(针尖的斜面朝上),进针深度只达外皮层之下。放低注射器,使之平放在兔的背部上,将≤100 μl 的乳化抗原注射进真皮层间,与前操作相同,分别在兔的背部选择其他4个部位

备选方案(皮下组织注射免疫法)

1. 准备用于注射家兔的抗原,并准备用于皮下注射免疫的家兔(方法同皮内注射)。 2. 将家兔背部皮肤捏出,以远离其下的肌肉,用24G注射针头全程穿剌,进入皮下,小心勿刺入肌肉组织中,在4个不同的部位各注射0.5 ml 抗原。 3. 用不完全弗氏佐剂进行家兔肌肉内法射以加强免疫(见基本方案)或者采用皮下组织注射,方法同上。

备选方案3(耳动脉放血)

1. 准备用于放血的家兔(见基本方案) 2. 将靠近家兔头部的半只耳朵托在梅指和食指上,用中指和无名指弯曲剩余的半只耳朵使之下垂,以便使血液随重力下流,用一个18G注射用针头(不带注射器)沿着兔耳中动脉进针,针尖指向兔耳根部。 3. 进针后,将注射用针头推进5~10 min,小心勿伤及动脉血管壁,用一支50 ml 的塑料离心管收集兔血(见基本方案),之后出针止血,并包扎

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