实验分类:蛋白质实验
最新修订时间:2022-02-10
简介
来源:丁香实验
操作方法
①如实验方案6所述裂解细胞。②4℃条件下23000g离心细胞裂解液30min。③倒出上清,测定沉淀的湿重。④用约10倍体积的洗涤缓冲液重悬沉淀,室温搅动悬浮液1h。⑤4℃条件下23000g离心混合物30min。⑥除去上清,并重悬沉淀。⑦重复④〜⑥步骤3次以上(直到重组蛋白的纯度>80%)。⑧溶解步骤⑦的沉淀物,每克湿重沉淀(由步骤③决定)加入约8ml的溶解缓冲液,在4℃条件下温和搅动混合物1
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问
重组载体转化大肠、菌p后送测,结果(十个碱基突变)两个氨基酸突变。老板叫换个cDNA模板再做一次,结果二十个碱基突变,什么原因?
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