凝胶中激酶直接分析实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。

内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案直接分析

1. 按适当百分比浓度制备聚丙烯酰胺分离胶，加入 10 mg/ml 激酶底物，使其在分离胶混合液中的终浓度达到 1 mg/ml。均匀混合后浇入制胶装置使其聚合。2. 按通常的方法制备有激酶活性样品的 SDS-PAGE 电泳样品，电泳。3. 电泳完毕后将胶放入 200 ml 20 %（V/V）2-丙醇/ 50 mmol/L Tris•Cl，pH 8.0 的洗液中，漂洗 20 min，换入新的缓冲液