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简介
蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物,当酶样品中含有磷酸转移酶活性时,蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。
内容来源于《精编分子生物学实验指南(第五版)》
来源:丁香实验
操作方法
1. 按适当百分比浓度制备聚丙烯酰胺分离胶,加入 10 mg/ml 激酶底物,使其在分离胶混合液中的终浓度达到 1 mg/ml。均匀混合后浇入制胶装置使其聚合。2. 按通常的方法制备有激酶活性样品的 SDS-PAGE 电泳样品,电泳。3. 电泳完毕后将胶放入 200 ml 20 %(V/V)2-丙醇/ 50 mmol/L Tris•Cl,pH 8.0 的洗液中,漂洗 20 min, 换入新的缓冲液