肽中磷酸化氨基酸位置测定实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

如果样品量不足以用于直接测序，可以用手工Edman降解法来降解肽以确定磷酸化氨基酸在肽中的位置。

来源：《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案手工EDMAN降解法

1. 根据候选肽段的列表确定循环数。将循环数指定为^每一循环的起始体积为 20 μl。2. 在称为反应管（微量离心管）的管子中将洗脱的肽溶解于 20 μl 去离子水中。3. 取 20/（x+1）μl 的一份样品到一新的管子中；此为起始样品材料，储存于 4℃。4. 补加去离子水到反应管中，使总体积恢复到 20 μl。此时开始对样品进行计数：4.1 确保从起始样品中实际取出所需的 cpm 量（作为起始