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核糖体失活展示系统实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

在这里我们介绍一种在体外将基因型和表现型相联系的新策略,用来选择功能蛋白质。这个策略里,蓖麻蛋白的 A 链在翻译时被激活,因此不需要去掉终止密码子,就能形成核糖体、信使 mRNA 和翻译出蛋白质的稳定复合物。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。

来源:丁香实验

操作方法

核糖体失活展示系统

这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。 3.1 RIDS 表达载体的构建 首先,需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子、RTA 和间隔区的 DNA 来构建 RIDS ( 图 13.2A )。13. 3.1.1〜13.3.3.3 部分详述了这个过程。尽管理论上用聚合酶链反应(PCR) 制备双链 DNA 是可行的,但是我们推荐用质粒来构建此 DN

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