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蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

分子生物学中最重要的环节之一是对微量蛋白质进行分析,使对编码待研究蛋白的 cDNA 序列的克隆成为可能。为有效地做到这一点,通常需要知道蛋白质的内序列。在这一方面,肽段的有效分离是极重要的。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。

来源:丁香实验

操作方法

蛋白质内序列分析用肽段的分离与纯化实验

操作流程如下:1) 用 SDS-PAGE 分离待研究蛋白。2) 凝胶用 0.05% 考马斯亮蓝 G 染色 15~30 min。3) 用含 5% 乙酸的 10% 甲醇溶液脱色。4) 在水中浸泡 10 min。5) 从凝胶上切下蛋白带,转移至微量离心管。切下一段不含蛋白质的凝胶作对照。如必要,可将凝胶切成较小的碎片,使之能容易地沉入微量离心管的底 部。6) 各管加入 1 ml 50% 甲醇。室温下孵育

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