亲和层析实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。

来源：丁香实验

操作方法

可溶性抗原或膜结合抗原的分离

1. 准备一支活化后被淬灭的Sepharose预柱（5 ml 柱床）和一支Ab-Spharose免疫亲和层析柱，并将它们串联起来。 2. 以冰冷TSA溶液重悬50 g 细胞至1~5×108细胞/ml，或往收集的细胞或组织匀浆中加入1~5倍体积的TSA。再加入等体积的冰冷裂解缓冲液，于4℃搅拌1 h。 3. 以4 000 g 离心10 min，除细胞核，轻轻倒出上清，保留之。