shRNA 设计

实验分类：

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

设计短发夹RNA

原理

shRNA是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子，可通过RNA干扰来抑制基因的表达。

应用

RNA干扰

来源：丁香实验

操作方法

shRNA设计

1. 克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由pol Ⅲ启动子控制。随后再连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。2. 两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。3. Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效地抑制目的基因。4. 在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和启