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简单序列重复区间 PCR

实验分类:

PCR 技术

别名:

inter-simple sequence repeat PCR,ISSR PCR

最新修订时间:

简介

简单序列重复区间 PCR,英文名是 inter-simple sequence repeat PCR, ISSR PCR,SSR 在真核生物中的分布是非常普遍的,并且进化变异速度非常快。有时为了增加多态性,常常采用一个 SSR 序列和一个随机引物组成的引物对,这样就又获得了另一种与 SSR 相关的标记,这种标记一端可以锚定在 SSR 序列中,另一端则可以通过随机引物来筛选,同一个 SSR 序列引物与不同的随机引物组合,可以获得各种各样的组合,从而得到更多的多态性。

目前,用于简单序列重复区间 PCR 的方法主要有 1 种:ISSR-PCR 技术。

原理

在真核生物基因组中均存在着由 1~4 个碱基对组成的简单重复序列又称之为微卫星(microsatellite)E,如 (GA)」、(AC)」、(GAA)」等。同一类微卫星 DNA 可分布在整个基因组不同位置上,由于其重复次数不同或重复程度不完全而形成每个座位的多态性。SSR 两端有一段保守的 DNA 序列,通过这段序列可以设计一段互补序列的寡聚核苷酸引物,对 SSR 进行 PCR 扩增,由于 SSR 多态性仅由简单序列的重复次数的差异引起的,通常表现为共显性。

应用

简单序列重复区间 PCR 的常用应用领域如下:

(一)遗传作图与基因定位

(二)亲缘关系和遗传多样性的研究

(三)分子标记辅助育种

来源:丁香实验团队

操作方法

ISSR-PCR 技术

ISSR-PCR 技术,英文名是 inter-simple sequence repeats-PCR,是在 SSR 的基础上发展起来的一种新型的分子标记,是于 1994 年创建的一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记。它的生物学基础仍然是基因组中存在的 SSR。ISSR 标记根据植物广泛存在 SSR 的特点,利用在植物基因组中常出现的 SSR 本身设计引物,无需预先克隆和测序。用于 ISSR-PC

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